歡迎訪問洛尚|LAWSON!
洛尚|LAWSON宣傳語

關鍵字:超聲波細胞破碎儀、粘度計、金屬浴、組織研磨儀

洛尚|LAWSON聯系方式

新聞動態

News
當前位置: 網站首頁 > 新聞動態 > 技術知識

技術知識

蛋白質組學研究,樣本準備知多少?

文章出處:轉載 作者:Lawson(洛尚中國) 人氣: 1177 發表時間:2018/3/15 17:01:13

俗話說好的開始是成功的一半,要想實驗成功,除了要有好的idea,樣本采集和預處理也至關重要。那么蛋白質組學研究中應該如何處理樣本呢?今天咱們就來聊聊蛋白質組學研究中那些常見樣本的準備!



動物篇

  • 取新鮮組織,剔除血管、脂肪、結締組織等與研究無關的干擾組織;

  • 用生理鹽水或PBS清洗血漬和污染物,用無塵吸水紙吸去表面液體;

  • 將組織剪切成邊長 0.5 cm 小塊或 100 mg 左右小塊;

  • 將組織塊用液氮速凍5 min以上,并于-80℃保存。


腦、心、肝、脾、肺、腎、肌肉、皮膚等常規動物組織,定量蛋白質組推薦送樣量>200 mg;修飾蛋白質組推薦送樣量>500 mg。



植物篇

  • 地上部分在樣本離體前用無菌水清洗雜質,水干后采集樣本;地下部分在樣本離體后,用預冷的PBS清洗雜質,無塵紙吸干后采集樣本;

  • 去除非目標組織及衰老、霉變等干擾部分;

  • 樣品剪切成小塊,錫紙包裹或放入凍存管中;

  • 將組織塊液氮速凍5 min以上,并于-80℃保存。

 

幼嫩的根、葉、花、愈傷組織等常規植物組織,定量蛋白質組推薦送樣量>1g;修飾蛋白質組推薦送樣量>2 g。



血液篇

血漿樣本

  • 使用EDTA抗凝劑和蛋白酶抑制劑的血常規管采集血液;

  • 輕輕地上下顛倒混勻 8-10 次;

  • 立即4℃,1600 g離心 10 min;

  • 用移液器將血漿轉移到離心管中,加入蛋白酶抑制劑,混勻,瞬時離心。


血清樣本

  • 使用真空采血管收集血液;

  • 輕輕地上下顛倒混勻5-6 次;

  • 4℃,靜置15-30 min;

  • 4℃,1600 g離心10 min;

  • 用移液器將上層淡黃色血清轉移到離心管中,加入蛋白酶抑制劑,混勻,瞬時離心。

 

血漿/血清樣本,定量蛋白質組推薦送樣量>500 ul。



細胞篇

貼壁細胞

  • 細胞培養至覆蓋度70-90%;

  • 去培養基,培養皿用10 ml PBS洗3次,培養皿倒扣,將液體控干;

  • 培養皿置于冰上,胰蛋白酶消化后,加入PBS懸浮細胞;

  • 收集到15 ml離心管中,4℃,400 g-1000 g離心5-10 min,去PBS;

  • 1 ml PBS重懸細胞后轉移到新的1.5 ml離心管;

  • 再次用上述條件離心,盡可能將上清去除干凈;

  • 用適量PBS重懸,液氮速凍,并于-80℃保存。


懸浮/貼壁細胞,定量蛋白質組推薦送樣量>1×107個細胞或體積>50ul細胞沉淀;

磷酸化蛋白質組推薦送樣量>5×107個細胞或體積>200ul細胞沉淀;

乙;、泛素化蛋白質組>1×108個細胞或體積>500ul細胞沉淀。

<p style="font>


微生物篇

  • 離心法或其他方法分離菌和培養基;

  • 收集菌體到15 ml離心管,用10 ml PBS洗3次;

  • 用1 ml PBS 重懸菌體,轉移到1.5 ml離心管中離心,用槍頭吸去上清,記錄菌的濕重或體積;

  • 用適量PBS重懸,每管100 ul分裝,液氮速凍,并于-80℃保存。


微生物菌體,定量蛋白質組推薦送樣量濕重>100mg或體積>100ul;修飾蛋白質組推薦送樣量濕重>300mg或體積>300ul。



膠點膠條篇

膠點膠條

膠點/膠條或者泳道皆可,推薦考馬斯亮藍染色,要求條帶清晰,無降解。


IP / Co-IP / Pull-down樣本

蛋白洗脫液要求蛋白總量>5ug,蛋白溶液進行SDS-PAGE電泳,下方兩種電泳方式任選其一即可。

  • 蛋白洗脫液,跑分離膠5cm(不含濃縮膠的SDS-PAGE),切下5cm膠條,放入1.5ml離心管中。

  • 蛋白洗脫液,跑SDS-PAGE標準的膠,切下目標條帶即可,放入1.5ml離心管中。


考慮到動物、植物、細胞、微生物、膠點膠條大家關注度較高,今天小編就先為大家介紹到這里,如果你手上有更加棘手的特殊樣本,不知道如何處理,也可以給小編留言!分享完常見樣本的采集和預處理,下期將會給大家整理不同類型樣本蛋白質提取方法,敬請關注www.giselebundchen.net




    Copyright ? 2003~2021 寧波洛尚智能科技有限公司版權所有 | LAWSON(洛尚中國) | 浙ICP備15028117號-2